九九免费视频_久久久国产精品免费爽爽 _日本特黄特色特爽大片_久久久久2020国产精品亚洲_久久国产精品视频影院_国产精品三级_99免费视频_午夜网站在线免费观看_欧美精品九九99久久在免费_午夜视频一区二区三区

PRODUCTS
產品中心
  • ELISA試劑盒
  • 細胞
  • 質粒
  • 標準品
  • PCR基因檢測試劑盒
  • 生化試劑
  • 生化檢測試劑盒
  • 抗體
  • 細胞系
  • 原代細胞
  • 細胞培養基
  • 細胞分析
  • 中藥標準品
  • 技術文章/ARTICLES

    首頁   >    技術文章   >   從費氏弧菌發光桿菌提取質粒向大腸桿菌DH10B電轉化方法

    從費氏弧菌發光桿菌提取質粒向大腸桿菌DH10B電轉化方法

    點擊次數:1819  更新時間:2017-07-13

    費氏弧菌發光桿菌制做選擇平板LB+25 mg/l Kan。
    ②核對好要轉化的質粒dna,在15 ml Falcon tube 和cuvette(電轉化用的石英樣品槽,兩面磨光,兩面磨砂)標好質粒名稱。將Falcon tube、cuvette、質粒DNA、SOC培養基按順序對應置于冰上預冷或解凍。轉化前將大腸桿菌(45 µl aliquot of E. coli DH10B Cells)置于冰上解凍(約3-5 min)。
    一、將冰桶移置超凈工作臺上,取200-1000 µl、20-100 µl、0.5-10 µl 移液器(Fubbouoette)到超凈工作臺上。先用0.5-10 µl移液器取0.5-2 µl質粒DNA到大腸桿菌細胞內,再用調節到50 µl 的(20-100 µl移液器)上下吹吸數次。在冰上放置2 min。
    二、用調節到50 µl 的(20-100 µl移液器)將質粒DNA和大腸桿菌細胞混合液轉移到電轉化石英樣品槽底凹槽的中央,在桌面上輕擊數次使之分散。在冰上放置1-2 min。
    三、先用紙將樣品槽擦拭一下,移到2.5 kV電脈沖發生器上,同時用1000 µl移液器吸好SOC培養基,約4.5-5 sec后鳴叫聲停后,立即加入樣品槽內(吹吸一次或不吹吸)。
    四、將細胞懸浮液從樣品槽中取出并加入15 ml Falcon tube,在37℃,200/min振蕩培養1 h。在樣品槽中加滿自來水,以便清洗。
    五、在此期間,可制做選擇平板LB+25 mg/l Kan。
    六、將培養后的轉化大腸桿菌懸液在超凈工作臺上全部倒入1.5 ml微量離心管,13000 rpm離心30 s(或到達13000 rpm后離心15 s)。用費氏弧菌發光桿菌1000 µl移液器取出大部分的上清,再用50 µl移液器全部棄掉剩余的上清,之后吸取100 µl lb培養基重新懸浮沉淀,上下吹吸數次到均勻。
    七、對三角鐵焚燒滅菌,標記選擇平板,取30 µl LB培養基加入平板中心,再取重新懸浮后的轉化大腸桿菌30 µl加入平板中心。待三角鐵冷卻后,在平板上研磨,至無可見液體為止。注意三角鐵一定要冷卻,或先在無菌液的平板上研磨加速冷卻。
    八、將選擇平板在37℃下培養,1天后觀察轉化效果。
    九、清洗電轉化樣品槽。先用自來水吸瓶沖洗十多次,之后加入酒精,放置1 h,之后用蒸餾水沖洗數次,甩干后,費氏弧菌發光桿菌水平放置在濾紙上晾干。

    關注我們:

    © 2025 上海一研生物科技有限公司版權所有  備案圖標.png滬ICP備14030958號-14    管理登陸    技術支持:化工儀器網    GoogleSitemap

    黄片6区| 国产性生活二级免费看| 欧美日韩一| 九九超碰| 一起草无码在线| 一区二区三区免费在线观看 | 午夜电影网| 天堂国产精品| 91视频国产精品| 成人国产中文欧美| ARMF-008 熟女全身百科全书第2期 - 加山夏子 - 蓝光超清 | 免费高清AV在线看 | 亚洲一级一区免费| 伊人春色av| 国产91九色视频| 99在线免费免费视频| 99激情免费视频| 亚洲天堂av无码| 性爱超级黄色视频网站免费91| 国产免费片在线无码免费看| 岛国免费在线观看欧美| 亚洲精品乱| 亚洲无码三级片| 亚洲AV产在线精品亚洲第一站| 99性视频| 中文字幕二区| 屁屁影院在线观看| 欧洲精品无码一区二区三区在线| 91欧美精品成人综合在线观看| 久久久无吗91| 91超碰成人综合网| 亚洲欧日韩中文字幕| 亚洲成人自拍网站| 91蝌蚪91 九色啦| 九视频在线视频黄片| 久久男女之间性生活视频免费看的| 深山熟女Av| 久久激情综合| 国产AV毛片| 国产一区在线播放| 久久久久亚洲AV成人无码电影| 嫩草视频在线观看|